Monkeypox Virus Echtzäit PCR Kit

1. ProufSammlung:Probe soll an sterile Réier gesammelt ginn

mat Standard technesch Spezifikatioune.

2. Reagens Virbereedung (Reagens Virbereedung Beräich)

Huelt d'Komponente vum Kit eraus, balanséiert se bei Raumtemperatur fir de Standby ze benotzen.

3. Exemplarveraarbechtung (Specimenveraarbechtungsberäich)

3.1 Nukleinsäure Extraktioun

Et ass recommandéiert 200μL flësseg Echantillon, Positiv Kontroll an Negativ Kontroll fir Nukleinsäure Extraktioun ze huelen, no den entspriechende Viraussetzungen a Prozedure vu virale DNA Extraktiounskits.

3.2 Lyophilized Pudder Opléisung an Schabloun Additioun

Bereet Monkeypox Virus Lyophilized Premix no der Unzuel vun de Proben.Eng Probe brauch ee PCR-Röhre mat lyophiliséierte Premix-Pulver.Negativ Kontroll a positiv Kontroll sollen als zwee Proben behandelt ginn.

(1) Füügt 15μL Opléisungsléisung an all PCR-Röhre mat lyophiliséierte Premix derbäi, füügt dann 5μL extrahéiert Proben / Negativ Kontroll / Positiv Kontroll an all PCR-Röhre respektiv.

(2) Deckt PCR-Röhren enk, fléissend PCR-Tuber mat der Hand bis lyophiliséierte Pudder komplett opgeléist a vermëscht ass, sammelt d'Flëssegkeet um Buedem vun PCR-Röhre duerch direkt Low-Speed-Zentrifugatioun.

(3) Wann Dir e gemeinsame Echtzäit PCR-Instrument fir d'Detektioun benotzt, transferéiert dann direkt PCR-Röhre an d'Verstäerkungsberäich;Wann Dir BTK-8 fir Erkennung benotzt, da musst Dir déi folgend Operatiounen ausféieren: Transfert 10 μL Flëssegkeet vum PCR-Röhre an d'Reaktiounschipwell vum BTK-8.Ee PCR Rouer entsprécht enger Well um Chip.Wärend der Pipetteoperatioun suergt dofir datt d'Pipette 90 Grad vertikal ass.D'Aerosol Barrière Pipette Tipps sollen am Zentrum vun der Well mat moderéiert Kraaft gesat ginn an ophalen der Pipette ze drécken wann et den éischte Gang erreecht (fir Bubbles ze vermeiden).Nodeems d'Brunnen gefëllt sinn, huelt eng Reaktioun Chip Membran eraus fir all Wells ze decken an den Chip gëtt dann an d'Verstäerkungserkennungsberäich transferéiert.

4. PCR Amplifikatioun (Detektiounsberäich)

4.1 Setzt d'PCR-Tubes / Reaktiounschip an de Reaktiounsbehälter a setzt d'Nimm vun all Reaktioun gutt an der entspriechender Uerdnung.

4.2 Astellunge vun Detektiounsfluoreszenz: (1) Monkeypox Virus (FAM);(2) Intern Kontroll (CY5).

4.3 Run de folgende Vëlo Protokoll

Protokoll vun ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

 BTK-8 Protokoll:

5. Resultater Analyse (kuckt w.e.g. an d'Instrument User Manual)

No der Reaktioun ginn d'Resultater automatesch gespäichert.Klickt op "Analyse" fir ze analyséieren, an d'Instrument wäert automatesch Ct Wäerter vun all Probe an der Resultatkolonne interpretéieren.Déi negativ a positiv Kontrollresultater sollen dem folgenden "6. Qualitéitskontroll" entspriechen.

6. Qualitéitskontroll

6.1 Negativ Kontroll: Kee Ct oder Ct>40 am FAM-Kanal, Ct≤40 am CY5-Kanal mat normaler Amplifikatiounskurve.

6.2 Positiv Kontroll: Ct≤35 am FAM Kanal mat normaler Amplifikatiounskurve, Ct≤40 am CY5 Kanal mat normaler Amplifikatiounskurve.

6.3 D'Resultat ass valabel wann all déi uewe genannte Critèren erfëllt sinn.Soss ass d'Resultat ongëlteg.

Resultat Interpretatioun

Déi folgend Resultater si méiglech:

NOTÉIERT: Wann et ongëlteg Resultat geschitt, muss d'Probe gesammelt an erëm getest ginn.